Curso Gratuito AGAN0212 Realización de Procedimientos Experimentales con Animales para Investigación y Otros Fines Científicos (Dirigida a la obtención del Certificado de profesionalidad a través

UNIDAD DIDÁCTICA 1. MANEJO Y MANIPULACIÓN DE ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN.

1. Reconocimiento del comportamiento natural de las especies animales ante la manipulación.
2. Aplicación de técnicas y uso de equipos de sujeción.
3. Manejo de jaulas especiales para sujeción de animales. Características y funcionamiento.
4. Técnicas de inmovilización manual de animales.
5. Aplicación de métodos de sedación: tipos y características.
6. Cumplimentado del libro de registro de entradas, salidas e incidencias de animales. Estructura y contenidos.
7. Uso de las herramientas informáticas de gestión de colonias de animales.

UNIDAD DIDÁCTICA 2. TRANSPORTE DE ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN.

1. Reconocimiento de la documentación de acompañamiento durante el transporte.
2. Utilización de contenedores: tipos e identificación.
3. Valoración de los requisitos de espacio por animal.
4. Cuidados, nutrición e hidratación durante el transporte: tipos de alimento.
5. Cuidados en la recepción de animales. Estrés del transporte.
6. Control de los animales procedentes de otros centros: cuarentenas, documentación requerida previamente a la llegada de animales.

UNIDAD DIDÁCTICA 3. PREPARACIÓN DE ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN PARA SER UTILIZADOS EN PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES.

1. Técnicas de socialización de los animales.
2. Aplicación de los mecanismos de sujeción de los animales manuales y mecánicos.
3. Aplicación de los métodos de eutanasia: objetivos, indicaciones, métodos aceptados.

UNIDAD FORMATIVA 1. INVESTIGACIÓN CON ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN

UNIDAD DIDÁCTICA 1. UTILIZACIÓN DE ANIMALES COMO MODELOS EXPERIMENTALES

1. Justificación de experimentación con animales de laboratorio:

- Referencias históricas, momentos y personajes claves en la utilización de animales como modelos experimentales

- Logros conseguidos en las ciencias biomédicas

- Búsqueda de otras alternativas. Razones científicas y éticas

2. Principio de las 3Rs:

- Reducción

- Refinamiento

- Reemplazo

3. Clasificación de los métodos alternativos:

- Modelos computerizados de predicción «in silico»

- Uso de organismos inferiores.

- Uso de huevos

- Métodos «in Vitro»

- Otros

4. Aspectos éticos y normativos de los cuidados proporcionados a los animales de experimentación.

- Transformación, limitación y percepción social

- Actitud del investigador frente al animal como sujeto

- Reconocimiento del animal como reactivo biológico

- Obtención de animales biológicamente estandarizados

5. Normativa sobre protección de animales utilizados para experimentación y otros fines científicos: seguridad, administración, transporte, recepción, aprovisionamiento de animales y eliminación de los cadáveres.

- Control social de la investigación

- Legislación Nacional y Europea

- Aspectos básicos de legislación

- Objetivo de la legislación

6. Normativa sobre: acreditación, elaboración y cumplimiento de los procedimientos de los laboratorios de ensayos clínicos.

- Seguimiento de Protocolos Normalizados de Procedimientos

7. Prevención de riesgos laborales en los procedimientos experimentales con animales:

- Niveles de bioseguridad

- Técnicas y prácticas de laboratorio

- Equipos de seguridad biológica.

8. Análisis de signos y comportamiento animal anómalos que interfieran en los procedimientos.

- Detección del dolor, signos de sufrimiento y angustia de animales de experimentación, siguiendo Protocolos Normalizados de revisión

- Conocimiento del aspecto normal de las distintas especies animales

- Pautas de observación del animal: Aspecto exterior, sonidos, movimientos, comportamiento y relación social

- Observación de la jaula o habitáculo, del lecho, cantidad de comida y agua ingerida, etc.

- Determinación cualitativa de la alteración de parámetros fisiológicos: pérdida o aumento de peso, ritmo de la respiración, temperatura, etc.

UNIDAD DIDÁCTICA 2. ADMINISTRACIÓN DE SUSTANCIAS EN LOS ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN

1. Administración de sustancias:

- Soluciones a administrar, princal

- Técnica de recogida de sangre

2. Métodos de extracción de sangre, ventajas e inconvenientes:

- Exanguinación

- Decapitación

- Del corazón

- De venas

- De arterias

- Métodos no recomendados de venopunción

- Obtención repetida de sangre: Cateterización

3. Formas de obtención de otros fluidos corporales:

- Heces y orina: jaulas metabólicas o sondas

- Líquido cefalorraquídeo

- Bilis

- Linfa.

- Líquido ascítico

4. Realización de eutanasia

- Definición y aspectos relacionados

- Métodos de eutanasia adecuados según la especie y la experimentación

- Identificación de equipos, instrumental y Materiales necesarios

5. Asistencia a una necropsia:

- Técnicas de necropsia siguiendo procedimientos establecidos

- Preparación del instrumental y material necesarios

- Recogida de muestras

- Registro de datos

6. Conocimiento de la normativa de:

- Protección frente a agentes químicos, biológicos y radiológicos

- Tratamiento y eliminación de residuos

7. Acciones para una correcta gestión de residuos:

- Segregación (recogida selectiva).

- Transporte y almacenamiento en la instalación

- Tratamiento previo a la eliminación

- Eliminación del residuo en la instalación productora o gestor autorizado

UNIDAD DIDÁCTICA 4. REGISTRO DE DATOS DE INVESTIGACIÓN EN EXPERIMENTACIÓN ANIMAL

1. Monitorización: determinación y registro de variables fisiológicas

- Exploración clínica: observación palpación y auscultación

- Uso de equipos: Métodos invasivos y no invasivos

2. Análisis de los resultados obtenidos en un procedimiento experimental

- Uso de programas informáticos específicos para el procedimiento experimental.

- Análisis estadístico en función del tipo de parámetro

3. Registro de tratamientos o de administración de sustancias y de obtención de muestras.

- Establecimiento previo al procedimiento del sistema de recogida de datos

- Características de un registro de datos: escrito o automatizado, duradero (copias de seguridad), completo, accesible, hojas específicas o bases de datos debidamente confeccionadas según datos, normalizados, establecer responsable de la conservación del archivo, etc.

4. Clasificación de los sistemas de instrumentación según sus objetivos:

- De adquisición de la información

- Diagnósticos

- De evaluación

- De monitorización y control

5. Identificación de los componentes del sistema global animal-instrumento:

- Animal: diferentes generadores de señales

- Estímulos: Visuales, acústicos, táctiles, eléctricos, etc.

- Transductor: sensibilidad, linealidad, respuesta en frecuencias (lineal, integrador y diferenciador) y rendimiento

- Equipo de tratamiento o procesado de una señal

- Equipo de presentación, lectura o registro: registros mecánicos o electrónicos

- Equipo de control automático de los estímulos, de los transductores, etc.

6. Problemas y soluciones en la medición de la actividad de los seres vivos:

- Inaccesibilidad de las variables

- Variabilidad de los datos

- Interrelaciones entre variables

- Interacción entre órganos y sistemas

- Efecto del transductor sobre la medición a realizar

- Artefactos en las medidas

- Limitaciones de la energía

7. Utilización de transductores para la medida de las principales variables biológicas:

- Temperatura

- Fuerza, desplazamiento, velocidad y aceleración

- Presión sanguínea

- Volumen y presión respiratoria

- Flujo en gases

- Flujo en líquidos

8. Medición de señales biológicas por biotelemetría:

- Objetivo

- Ventajas

- Componentes de un sistema de biotelemetría

9. Utilización de procedimientos no quirúrgicos con equipos específicos de estudio o medida de variables:

- Diagnóstico por imagen.

- Telemetría

- Estudios de comportamiento

- Pletismografía

- Otros métodos no invasivos

UNIDAD FORMATIVA 2. ANESTESIA Y ANALGESIA EN ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN

UNIDAD DIDÁCTICA 1. ANESTESIA DE LOS ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN

1. Anestesia: Definición y objetivos.
2. Componentes de la anestesia general y su influencia en los resultados experimentales:

- Hipnosis o sueño

- Analgesia o ausencia de dolor

- Relajación muscular

- Bloqueo de la act de la cirugía

- Utilidad de anestesia inhalatoria

UNIDAD DIDÁCTICA 2. ANALGESIA DE LOS ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN

1. Analgesia: Definición y ventajas de su utilización
2. Reconocimiento y evaluación del dolor:

- Escalas de severidad (gravedad o intensidad de dolor)

- Signos clínicamente valorables: cambios en la actividad, aspecto, temperatura, ingesta, variables fisiológicas y vocalizaciones.

3. Técnicas de analgesia:

- Principales fármacos analgésicos

- Analgesia polimodal o multimodal

- Analgesia preventiva

- Analgesia local y regional

UNIDAD FORMATIVA 3. TÉCNICAS QUIRÚRGICAS BÁSICAS EN ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN

UNIDAD DIDÁCTICA 1. PREPARACIÓN DE LA CIRUGÍA EN EXPERIMENTACIÓN ANIMAL

1. Planificación de la cirugía:

- Elección y disponibilidad de los animales

- Valoración preoperatoria del estado sanitario del animal

- Preparación del animal

- Comprobación de la disponibilidad de instalaciones quirúrgicas y pre- y post-operatorias

- Elección y preparación del instrumental quirúrgico, aparatos y accesorios

- Preparación del cirujano

2. Selección del material quirúrgico:

- Agujas quirúrgicas.

- Material de sutura. Sutura absorbible y no absorbible.

- Otros accesorios quirúrgicos.

3. Anatomía y fisiología general de órganos y sistemas de los animales de laboratorio.

- Datos anatómicos, fisiológicos y biológicos de los animales más utilizados en investigación

UNIDAD DIDÁCTICA 2. APLICACIÓN DE TÉCNICAS QUIRÚRGICAS BÁSICAS EN PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES

1. Conocimiento de técnicas quirúrgicas básicas en experimentación animal:

- Corte de la piel y otros tejidos

- Control del sangrado y de la desecación de tejidos y órganos

- Técnicas y nudos de sutura

2. Aprendizaje de las técnicas quirúrgicas más comunes en la rata:

- Laparotomía

- Accesos a grandes vasos: vena yugular y arteria carótida

- Ovariohisterectomía

- Cesárea

- Castración: ovariectomía y orquiectomía

3. Procedimientos quirúrgicos de obtención de muestras biológicas.

- Extracción de tejidos sólidos y realización de una biopsia.

- Perfusión de tejidos y órganos.

4. Supervisión y cuidados postoperatorios:

- Cuidados de la herida

- Complicaciones quirúrgicas postoperatorias

5. Protocolos de supervisión y determinación de criterios de punto final postquirúrgico de los animales.

- Supervisión diaria de la herida, desinfección y empleo de antibióticos.

- Utilización de analgesia postoperatoria

- Aplicación diaria de escalas de severidad

- Determinación del punto final y eutanasia

UNIDAD FORMATIVA 1. REPRODUCCIÓN Y CRÍA DE ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN

UNIDAD DIDÁCTICA 1. REPRODUCCIÓN ANIMAL

1. Anatomía del aparato reproductor masculino:

- Esquema del aparato reproductor masculino en mamíferos

- Órganos, conductos y vías, vesículas y glándulas

2. Fisiología reproductiva masculina:

- Desarrollo y funcionamiento del aparato reproductor

- Espermatogénesis, almacenamiento y maduración de los espermatozoides

3. Anatomía del aparato reproductor femenino:

- Esquema del aparato reproductor femenino en mamíferos

- Órganos y conductos

- Características anatómicas en las distintas especies de animales de experimentación

4. Fisiología reproductiva femenina:

- Desarrollo y funcionamiento del aparato reproductor

- Oogénesis y ovulación

- Diferencias en la ovulación según la especie: espontánea o inducida

5. Características reproductoras de los principales animales de laboratorio

- Vida fértil y edad óptima de cruce

- Periodo de gestación

- Celo postparto

- Pseudogestación

- Efecto Witten (sincronización del celo)

- Efecto Bruce

6. Fisiología del celo, cubrición y gestación:

- Ciclo estral. Fases del ciclo

- Hembras poliestricas (anuales y estacionales), biestricas y monoestricas

- Cambios fisiológicos y comportamiento de las hembras durante el celo

- Influencia en la conducta sexual de los factores: Sociales, ambientales y fisiológicos

- Duración del celo y aspectos relacionados con la cubrición según especie animal

- Cos genéticamente (OMG).

- Legislación y normativa actualizada sobre la utilización de OMG

- Precauciones y medidas de contención de animales modificados genéticamente según la especie

UNIDAD DIDÁCTICA 3. GENÉTICA DE LOS ANIMALES DE LABORATORIO

1. Estandarización genética.

- Calidad del animal de experimentación: Interacción genotipo-ambiente

- Causas que justifican el control de la pureza genética: Mutaciones espontáneas e interacción accidental con otra cepa

- Prevención del control de la pureza genética: congelación de embriones y aislamiento físico

2. Factores que afectan la composición genética de las poblaciones de laboratorio:

- Selección genética de los animales.

- Consanguinidad: concepto, aplicaciones, consecuencias en los animales.

- Deriva y variabilidad genética: Definición y consecuencias en la colonia.

3. Animales homocigóticos y heterocigóticos:

- Manifestación de un Knock-out en homocigosis

- Mantenimiento de líneas transgénicas en heterocigosis y genotipado para detección de homocigóticos

4. Categorías de animales de laboratorio en función de su constitución genética.

- Características de las líneas consanguíneas

- Líneas genéticamente estandarizadas: Líneas consanguíneas, Híbridos F1, coisogénicas, congénitas, consanguíneas recombinantes (RIS), congénitas recombinantes (RCS), consómicas y conplásticas. Líneas no consanguíneas

- Influencia de la genética sobre los resultados experimentales

- Aplicaciones específicas en investigación de las distintas categorías genéticas

5. Nomenclatura e identificación de animales. Reglas de nomenclatura internacional

- Nomenclatura de las líneas consanguíneas.

- Nomenclatura de las líneas coisogéncas y congénitas

- Nomenclatura de las líneas consanguíneas recombinantes

- Nomenclatura de las líneas cogénicas recombinantes

- Nomenclatura de los ratones knock-out

- Nomenclatura de los roedores no consanguíneos

6. Transgénesis y mutagénesis dirigida:

- Técnicas de obtención de animales transgénicos: Método de microinyección y Método del retrovirus

- Técnicas para generar mutaciones heredables en ratón

- Creación de ratones Knock-out

7. Genotipado y fenotipado.

- Detección de la alteración genética mediante reacción en cadena de polimerasa (PCR)

- Equipos para PCR: termocicladorres

- Identificación del individuo

- Bases de datos fenotípicas internacionales

- Métodos de control de la pureza genética de los animales de experimentación:

- Marcadores bioquímicos

- Marcadores Inmunológicos

- Análisis del color del pelaje

- Injertos de piel

- Caracteres reproductivos

- Marcadores de ADN. Fingerprinting de ADN. Análisis de microsatélites por PCR. Otras técnicas moleculares

8. Bases de datos y bancos de animales transgénicos. Gestión a través de programas informáticos

- Registro de información individualizada de: Construcción, línea, generación, genotipo, sexo, color, edad, identificación, caracterización fenotípica, progenitores (genealogías), investigación de destino y responsable

UNIDAD FORMATIVA 2. REPRODUCCIÓN ASISTIDA EN ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN

UNIDAD DIDÁCTICA 1. TÉCNICAS NO NATURALES DE REPRODUCCIÓN

1. Obtención de gametos y embriones:

- Lavado del epidídimo y los vasos deferentes y esperma eyaculado (lavaje de los cuernos uterinos)

- Lavado de oviducto y útero

- Conservación de espermatozoides, ovocitos y embriones

2. Técnicas de reproducción asistida:

- Ventajas e inconvenientes de la inseminación artificial y la fertilización in vitro

3. Técnicas de la Inseminación artificial:

- Inseminación por vía vaginal

- Inseminación por vía uterina

- Transferencia del esperma dentro del oviducto por procedimiento quirúrgico

4. Etapas de la Inseminación artificial:

- Elección de las hembras con elevado índice de fertilidad

- Protocolo de superovulación

- Sincronización del celo - Inseminación al comienzo del estro

- Cruce de hembras con machos vasectomizados - pseudogestación

5. Etapas y técnica de la fecundación in Vitro (FIV):

- Medios de cultivo de los gametos, incubación y fecundlargo plazo

- Reducción de costes

- Control de las patologías asociadas al mantenimiento animales vivos

6. Ventajas e inconvenientes de la crioconservación de espermatozoides o embriones:

- Tiempo

- Coste

- Recursos materiales

7. Crioconservación de gametos y embriones.

- Congelación de esperma: crioprotectores, temperaturas y tiempos específicos

- Estrategias de congelación de oocitos: en estado inmaduro (en forma de vesícula germinal) y en estado maduro (después de la ovulación) bajo la forma de oocitos en metafase II, con mayor eficacia.

- Embriones: estadío-eficacia del sistema

- Sistemas de identificación, registro y mantenimiento de gametos y embriones criopreservados, bancos de embriones y gametos congelados

- Medidas preventivas y de protección durante el manejo de productos para la criopreservación.

- Control de calidad.

UNIDAD DIDÁCTICA 1. CULTIVOS DE CÉLULAS, TEJIDOS Y ÓRGANOS PROCEDENTES DE ANIMALES

1. Histología y fisiología celular básica.

- Concepto de morfología y fisiología

- Niveles de organización. Relación entre estructura y función

- Clasificación de los tejidos

2. Proliferación y diferenciación celular. Adhesión celular.

- Concepto de proliferación y diferenciación celular (especialización)

- Factores reguladores: Señales endógenas y exógenas

- Contacto directo célula-célula. Moléculas de adhesión

3. Tipos de células básicas y características tanto morfológicas como fisiológicas.

- Célula procariota: estructura y funciones básicas

- Célula eucariota: Organización, estructura y función de los diferentes orgánulos celulares, organización función del núcleo.

- Descripción de algunos tipos de células que se suelen utilizar en cultivos celulares: tumorales, epiteliales, Tejido conjuntivo, Tejido muscular, Tejido nervioso, Sangre, tejidos linfoides y Células madre.

4. Métodos alternativos al empleo de animales en investigación.

- Ventajas de los ensayos in vitro: Ética y legislación, Control del medio extracelular, Homogeneidad de la muestra, Disminución del gasto y tiempo, objetivables y cuantificables, precisión, reproducibilidad, etc.

- Limitaciones: Excesiva sensibilidad, Límite de producción, Inestabilidad, Validación del modelo, etc.

5. Obtención de células. Cultivos celulares primarios. Obtención de una línea celular.

- Sistemas para la obtención de células: Banco de células o aislamiento a partir de un tejido

- Métodos de aislamiento del tejido, disección/disgregación

- Requisitos especiales para el cultivo de células primarias

- Ventajas e inconvenientes de la utilización de células primarias.

- Conservación o mantenimiento células primarias. Requisitos especiales para el cultivo de células primarias.

6. Evolución de las líneas celulares y líneas celulares inmortalizadas. Desarrollo de líneas celulares continuas.

- Tipos de líneas celulares establecidas. Células en monocapa y células en suspensión. Células inmortalizadas y transformadas

- Preparación de las líneas.

- Control de los cultivos celulares (pH, sobrecrecimiento, estado del medio, contaminación, etc.)

- Recuento de células. Preparación de células en suspensión y de células adherentes. Uso del hemocitómetro.

- Subcultivos de células. Curva de crecimiento.

- Métodos para aumentar la producción.

- Ventajas y desventajas de la líneas celulares estables

7. Bases de datos y bancos de líneas celulares y material biológico:

- Qué es un banco de células

- Bancos internacionales más importantes: American Type Culture Collection (ATCC) y European Collection of Cell Cultures (ECACC), etc.

- Otros bancos de células: Banco Nacional de Líneas Celulares, etc.

8. Anatomía básica de órganos y tejidos empleados en investigación in vitro.

- Órganos y tejidos más comunes: hígado, corazón, riñón, páncreas, branquias, encéfalo, piel, sangre, etc

- Ingeniería de tejidos

9. Modelos con órganos y tejidos para procedimientos in vitro:

- Cultivo y baños de órganos

- Órganos perfs de Petri, Multiplacas, Frascos de Roux de diferentes formas y tamaños o Especiales, como las «roller bottles» o con portaobjetos

10. Protocolos de trabajo en cabina de flujo laminar y en poyata de laboratorio.

- Inicio del trabajo en cabina: encendido y puesta a punto de la cabina, desinfección y recomendaciones para el trabajador.

- Durante la manipulación: distribución del material y utilización de la zona de trabajo, control del flujo y turbulencias de aire, actuación ante un vertido de material contaminado y alarmas.

- Al finalizar el trabajo: Limpieza, vaciado de material, apagado y cerrado de la cabina

- Mantenimiento: semanal (limpieza y desinfección de superficie y paredes, mensualmente (revisión de válvulas interiores) y anualmente se certificará por una entidad cualificada.

- Mesa de trabajo o poyata de laboratorio: orden, limpieza y desinfección

11. Protocolos de manejo de placas de cultivos.

- Apertura del material estéril dentro de la cabina

- Marcaje de las placas en la tapa y en un lateral de la base, de manera distinta para cada placa, para evitar intercambiar tapas.

- Toma del medio con la pipeta y transferencia a la placa entreabierta (no retirar la tapa)

- Tratamiento como residuo según riesgo biológico del cultivo

12. Áreas de un laboratorio de cultivo de tejidos.

- Área de preparación de medios: equipamiento

- Área de limpieza y esterilización: dimensiones mínimas, organización y equipamiento (máquinas de lavado de material y esterilizadores)

- Área de transferencia: cabina de flujo laminar/seguridad biológica y otros equipos

- Área de incubación o cámaras de crecimiento: control de iluminación, temperatura y humedad. Alarmas

13. Lavado, esterilización y preparación de materiales:

- Vidrio: pipetas, probetas, vasos, matraces y botellas de vidrio para preparación, almacenamiento y clasificación de medios y reactivos

- Plástico: Cultivos en placas y botellas, tubos de ensayo para diferentes técnicas y preparación de alícuotas de los reactivos

- Lavado, preparación y esterilización del material: área específica del laboratorio, con el método y desinfectantes adecuados

- Métodos de esterilización: Calor directo, flameado; Calor seco, Horno Pasteur y Calor Húmedo, Autoclave

14. Contaminaciones cruzadas y microbiológicas y su prevención.

- Principales contaminantes: microorganismos, otras líneas celulares del laboratorio y contaminación química

- Fuentes de la contaminación accidental: origen del cultivo tejido o células, proceso de manipulación del cultivo, empleo de reactivos biológicos contaminados, material contaminado y ambiente de trabajo

- Prevención para evitar contaminaciones: obtener siempre los cultivos de centros reconocidos que certifiquen el origen; trabajar bajo unas correctas normas de trabajo, limpieza y esterilidad, utilización de Inhibidores del crecimiento de los contaminantes (antibióticos y antifúngicos), etc.

15. Características y naturaleza del sustrato en cultivos celulares.

- Tipos de sustratos

- Factores de adhesión celular

- Interacciones células-substrato: Medios semisólidos: matrices.

- Métodos de disgregación celular: mecánicos, químicos y enzimáticos

16. Medios y reactivos de cultivo celular. Características principales, preparación y renovación.

- Características de los medios de cultivo celular: composición, osmoralidad, viscosidad, tensión superficial, especificidad, pH, capacidad tamponadora, esterilidad, etc.

- Componentes y suplementos: Agua, sales, glucosa, aminoácidos y vitaminas. Suero, factores de crecimiento y otros suplementos específicos. Indicador de pH. Pautas par el suplemento con antibioticos

- Tipos de medios. Medios libres de suero.

- Opciones para la elección, en polvo, líquido concentrado o listo para usar

- Preparación de medios líquidos, a partir de polvo (filtración) o esterilizados en autoclave

- Opciones para la elección, en polvo, líquido concentrado o listo para usar

- Preparación de medios líquidos, a partir de polvo (filtración), concentrados o esterilizables en autoclave

17. Factores de cros celulares en el campo de la toxicidad

- Limitaciones de los ensayos in Vitro para estudios de toxicidad

- Ensayos utilizados en pruebas de citotoxicidad: Pruebas citológicas: observación al microscopio, Pruebas bioquímicas. Pruebas de viabilidad (de respuesta inmediata o de corto plazo y de respuesta a largo plazo o de supervivencia)

- Células asesinas

- Requisitos de las pruebas de citotoxicidad

- Preparación de las células efectoras y diana

- Prueba de citotoxicidad

- Resultados e interpretación

UNIDAD DIDÁCTICA 3. PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES CON ÓRGANOS AISLADOS, TEJIDOS Y CÉLULAS ANIMALES

1. Experimentos con cultivos de tejidos de origen animal mediante su exposición a sustancias o elementos terapéuticos o tóxicos.

- Estudios del efecto de diferentes sustancias en cultivos con tejidos y órganos diana. Aplicaciones

- Estudios del efecto de diferentes sustancias en cultivos de células (primarias o líneas establecidas). Aplicaciones

2. Técnicas de valoración del crecimiento y la viabilidad celular.

- Rojo neutro

- Prueba MTT

- Liberación al medio de la láctico deshidrogenasa (LDH)

- Ensayos de fluorescencia

- Toxicidad relativa: (concentración efectiva en el 50 % de las células)

3. Recolección de células y sus productos.

- Recolección de las células de los cultivos: centrifugación continua o filtración y extracción en régimen continuo

- Sistemas cromatográficos para el aislamiento y purificación de las toxinas. Equipos relacionados

4. Prevención de riesgos laborales en la manipulación de órganos, tejidos y células.

- Principales riesgos biológicos

- Evaluación de riesgos: Propiedades intrínsecas del cultivo celular, como resultado de la modificación genética, como resultado de una infección con agentes patógenos. Condiciones de trabajo

- Normas de trabajo en los laboratorios de cultivos celulares

UNIDAD DIDÁCTICA 4. INSTRUMENTACIÓN Y MÉTODOS DE REGISTRO DE SEÑALES A PARTIR DE ÓRGANOS AISLADOS, TEJIDOS Y CÉLULAS ANIMALES

1. Procesamiento de señales:

- Esquema general: transductor, amplificador y sistema de registro

- Equipos de espectroscopia de Bioimpedancia eléctrica

- Equipos de medida de la biomasa

2. Transductores: de fuerza, de presión, de temperatura.
3. Electrodos para biopotenciales y bioquímicos.
4. Ruidos en la salida de datos y métodos de filtrado.
5. Programas informáticos de recogida de datos.

UNIDAD DIDÁCTICA 1. MANIPULACIÓN, PROCESAMIENTO, CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE MUESTRAS BIOLÓGICAS ANIMALES

1. Materiales y equipos básicos del laboratorio de análisis clínicos.

- Generales: agitadores, homogeneizadores, centrífugas, balanzas, pipetas, dispensadores, baños termostáticos, incubadoras, autoclaves, estufa, pHmetros, entre otros

- Análisis químicos: cromatógrafos, espectrómetros, HPLC

- Análisis bioquímicos: analizadores automatizados, espectrofotómetros

- Análisis hemáticos: hemocitómetros, lupas, coagulómetros, tromboelastógrafos,

- Análisis microbiológicos: cabinas de cultivos, incubadoras, estufas

- Organización general de un laboratorio y de sus secciones

2. Reactivos de laboratorio.

- Disolventes

- Anticoagulantes

- Tampones

- Fijadores

- Alcoholes

- Tinciones

3. Material de protección, seguridad y contenedores para eliminación de residuos.

- Equipos de protección individual y colectivos (EPIs, cabinas, SAS, presión diferencial)

- Protocolos de actuación. Normativa específica relativa a la gestión de residuos biosanitarios.

- Tipos de contenedores.

- Eliminación selectiva de residuos.

4. Operaciones básicas de laboratorio.

- Preparación de disoluciones y diluciones.

- Resolución de problemas.

- Centrifugación de muestras.

5. Tipos de muestras: sangre, orina, LCR, semen, exudados u otros.

- Métodos de obtención.

- Métodos de conservación.

- Métodos de procesado.

6. Parámetros comunes analizables en las muestras biológicas.

- Óptico (macros y microscópico)

- Químicos

- Bioquímico y hematológico

7. Procesamiento de muestras en función de las mismas.

- Según el origen y objeisis de rutina de la orina.

- Estudio del sedimento urinario. Otras determinaciones analíticas en orina.

- Errores que pueden alterar los resultados. Interpretación de resultados.

8. Estudio de las heces.

- Características generales de las heces.

- Obtención de una muestra de heces para: detección de sangre oculta, sustancias o elementos formes, análisis microbiológico y parasicológico

- Análisis de muestras fecales. Fisiopatología de las heces.

- Determinaciones de laboratorio en el estudio de las muestras fecales.

- Errores que pueden alterar los resultados. Interpretación de resultados.

9. Estudio de otros fluidos corporales:

- Métodos de obtención y manejo de muestras de: semen, saliva, mucosas, exudados y otros líquidos orgánicos (líquido cefalorraquídeo, peritoneal, pleural, articular, etc.).

UNIDAD DIDÁCTICA 3. PROCESAMIENTO DE MUESTRAS ANIMALES PARA SU ESTUDIO ANATOMO-PATOLÓGICO

1. Tipos de muestras para el estudio anatomo-patológico.

- Frescas, conservadas,…

- Procesado, tinción, conservación

2. Métodos y técnicas para la obtención de las muestras.

- Punción Aspiración con Aguja Fina (PAAF).

- Biopsia

- Asepsia

3. Procesamiento de muestras para estudio histológico. Instrumentos y materiales utilizados.

- Automatizado o manual (corte, deshidratación, inclusión, fijación)

- Equipos (micrótomos, baños, microscopios…)

4. Procesamiento de muestras para estudio citológico. Instrumentos y materiales utilizados.

- Deshidratación (química, térmica,…)

- Fijación (química, térmica, …)

- Tinción

UNIDAD DIDÁCTICA 4. PREVENCIÓN DE RIESGOS LABORALES EN EL LABORATORIO DE ANÁLISIS DE MUESTRAS ANIMALES

1. Factores de riesgo en el manejo de muestras biológicas.

- Biológicos

- Físicos

- Químicos

2. Legislación sobre prevención de riesgos laborales y sobre gestión de residuos.

- Legislación y normativa actualizada sobre clasificación, envasado y etiquetado de preparados peligrosos

- Legislación y normativa actualizada sobre la declaración de sustancias nuevas y clasificación, envasado y etiquetado de sustancias peligrosas

- Legislación y normativa actualizada sobre el Reglamento de almacenamiento de productos químicos y sus instrucciones técnicas complementarias

3. Medios de protección personal en el laboratorio y medidas de higiene.

- Medidas generales relativas al local

- Precauciones durante el desarrollo del trabajo

- Reglas de higiene personal

- Revisiones médicas del personal

UNIDAD FORMATIVA 1. TÉCNICAS DE SEPARACIÓN DE ADN, ARN Y PROTEÍNAS DE MUESTRAS BIOLÓGICAS

UNIDAD DIDÁCTICA 1. OBTENCIÓN, MANIPULACIÓN Y PROCESAMIENTO DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA ANÁLISIS DE ADN, ARN Y PROTEÍNAS

1. Tipos de muestras para análisis de ADN, ARN y proteínas.

- Extracción de ADN (a partir de sangre, tejidos o células en cultivo, células bucales,…)

- Extracción de ARN (mediante tiocianato de guanidina, urea-cloruro de lítio, purificación de poli(A)-ARN,

2. Determinación analítica. Perfil analítico. Cartera de servicios.

- Determinación de ácidos nucleicos

- Separación analítica y preparativa del ADN (electroforesis analítica, geles de agarosa, …)

3. Errores más comunes en la manipulación de las muestras.

- Identificación y etiquetado de las muestras

- Contaminación (por RNAsas, DNA,…)

- Degradación enzimática

4. Características generales de la obtención y procesamiento de muestras para análisis de ADN, ARN y proteínas.

- Obtención de ADN y ARN a partir de tejidos líquidos (anticoagular)

- Inhibidores RNAsas

5. Prevención de riesgos en la obtención, manipulación y procesamiento de muestras biológicas.

- Recepción o toma de muestras. Medidas preventivas

- Precauciones generales relativas al laboratorio

- Precauciones durante el desarrollo del trabajo

- Reglas de higiene personal

UNIDAD DIDÁCTICA 2. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA ANÁLISIS DE ADN, ARN Y PROTEÍNAS

1. Etiquetado e identificación de las muestras.
2. Sistemas y formatos de archivos. Sistemas de almacenamiento.
3. Equipos de Enzima que dirige: polimerasa de ARN

- Modificaciones postranscripcionales.

4. Mecanismos de reparación del ADN.

- Agentes genotóxicos y mecanismos de reparación del DNA

- Reparación de dímeros de pirimidinas mediante fotoreactivación

- Remoción de grupos metilo

- Bases mal apareadas

- Metilación del DNA

- Reparación del DNA durante o después de su replicación

- Reparación de cortes en ambas cadenas del DNA

- Sistemas De reparación de DNA: NER (Nucleotide Excision Repair)

- Mecanismos de reparación de DNA: BER (Base escisión Repair)

5. Mutaciones del ADN, alteraciones en las proteínas que sintetizan y enfermedades asociadas.

- Alteraciones que puede sufrir el ADN: Mismatch (mal apareamiento), Desaminación, Pérdida de bases, Unión covalente entre bases de la misma cadena, Unión de grupos alquilo, Ruptura de simple cadena (nick) y Ruptura de doble cadena

- Alteraciones en las proteínas que se sintetizan y enfermedades asociadas. Desnaturalización

6. Estructura y función de las proteínas.

- Aminoácidos y neurotransmisores

- Enlaces peptídicos, oligopeptidos y polipeptidos

- Estructura primaria, secundaria , terciaría y cuaternaria

- Funciones de las proteínas: estructural, reguladora, de transporte, de reserva, enzimática, mensajera y de receptores químicos

7. Transcripción y traducción.

- Moléculas implicadas en la transcripción y traducción de las proteínas

- Fases de la transcripción de las proteínas

- Fases de la traducción de las proteínas

- Regulación de la transcripción y traducción

8. Síntesis y modificación de las proteínas.

- Moléculas implicadas en la síntesis y traducción de las proteínas

- Fases de la síntesis de las proteínas

- Fases de la modificación de las proteínas

- Regulación de la síntesis y modificación de las proteínas

9. Alteraciones conformacionales de las proteínas.

- Serpinopatías

- Proteínas priónicas

- Neuroserpinas

- Hemoglobina

- Repeticiones de glutamato

- Proteína Tau

- Inmunoglobulinas cadenas ligeras

- Proteína CFRT Péptido B-amiloide

- Superóxido dismutasa

- B2 microglobulina

UNIDAD DIDÁCTICA 4. METODOLOGÍA APLICADA A LA SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS

1. Electroforesis.

- Tipos de electroforesis: unidimensionales, bidimensionales y técnicas relacionadas.

- Separación electroforética de las proteínas séricas. Patrones de normalidad y de alteración

- Características del material y de los reactivos. Averías o disfunciones

2. Técnicas cromatográficas.

- Características de los equipos. Condiciones de uso y mantenimiento

- Calibración. Averías o disfunciones

- Características del material y de los reactivos

3. Técnicas de inmunodetección.

- Inmunocitoquímica

- Western blot

- Inmunoprecipitación

- Co-inmunoprecipitación

- Pull-down

- TUNEL

4. Espectrometría de masas.

- Fundamento y aplicaciones.

- Características de los equipos.

- Condiciones de uso y mantenimiento. Calibración. Averías o disfunciones.

- Características del material y de los reactivos.

5. Tecnología de microarrays y chips de proteínas.

- Microarrays de ADN: Diseño de un microarrays de ADN. Tipos

- Microarrays de Proteínas: Diseño de un microarrays de proteínas. Tipos

- Microarrays de Carbohidratos: Diseño de microarrays de carbohidratos. Aplicaciones

- Microarrays de Células

- Microarrays de Tejidos

- Perspectivas de mercado de los microarrays y biochips en el área de salud humana

6. Bioinformática. Bases de datos de proteómica.

- Genómica funcional

- Relación entre la biología y la informática

- Biochips

- Bioinformática

- Bibliografía

UNIDAD FORMATIVA 2. ANÁLISIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS

UNIDAD DIDÁCTICA 1. METODOLOGÍA APLICADA AL ANÁLISIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS

1. Extracción. Purificación y análisis espectroscópico y electroforético de ácidos nucleicos.

- Material y métodos

2. Amplificación de ADN mediante PCR y variantes.

- El ADN

- Los enzimas

- Los nucleótidos

- Los cebadores

- Limitaciones y problemas de la PCR (tamaño secuencias limitado, PCR previa, contaminación, inespecifidad de cebadores,…)

3. Electroforesis y técnicas relacionad Aplicaciones del Método Southerm

- Mapas de restricción

- Detección de polimorfismos (RFLP, VNTR, STR) y deleciones.

4. Secuenciación.

- Secuenciación química, método de Maxam y Gilbert

- Secuenciación enzimática, método de Sanger o de los dideoxinucleótidos.

- Tipos de secuenciaciones enzimáticas (Cíclica, múltiple, automática, quimioluminiscente)

5. Tecnología de microarrays y chips de ácidos nucléicos.

- Utilidad: analizar el genoma completo de un organismo

- Fundamento: hibridación con sondas

- Soporte: placas microtitulación o membranas de blotting

- Fabricación: pueden ser creados en el laboratorio o usando robótica : Macroarray: señales > 300 micras y Microarray: pocillos < 200 micras

6. Aplicaciones: identificación de secuencias (genes, Mutaciones), determinación del nivel de expresión génica, descubrimiento de genes, diagnóstico de enfermedades, Farmacogenómica: desarrollo de Fármacos y Toxicogenómica: investigación Toxicológica
7. Bioinformática. Bases de datos de genómica.

- Introducción a la Bioinformática

- Consulta de Bases de datos en biología molecular

- Alineamiento de secuencias

- Predicción de genes

- Introducción a los microarrays de DNA

UNIDAD DIDÁCTICA 2. PRINCIPIOS GENERALES DE ENFERMEDADES DE BASE GENÉTICA

1. Genoma: células, cromosomas y genes.

- Definición de genoma, gen y cromosoma

- Organización, estabilización y localización del genoma

2. Estructura y función de los genes y cromosomas.

- Estructura del ADN

- Estructura del ARN

- El código genético

- Secuencias codificantes versus no codificantes

3. Bases cromosómicas de la enfermedad.

- Citogenética. El cariotipo normal en los roedores de laboratorio

- Anomalías del número de cromosomas (Heteroploidías)

- Anomalías de la estructura de los cromosomas

4. Herencia y enfermedad: enfermedades monogénicas, patrones de herencia, enfermedades poligénicas. Susceptibilidad genética.

- Genético

- Congénito

- Hereditario

5. Genética de las enfermedades comunes.

- Modelos provenientes de mutaciones espontáneas o inducidas

- Modelos generados por transgénesis

- Modelos generados in Vitro por manipulación de células ES

- Modelos generados por transgénesis condicional

6. Genética de la reproducción y del diagnóstico prenatal.

- Modelos animales del desarrollo embrionario

- Diagnóstico prenatal rápido de aberraciones cromosómicas por PCR

- Diagnóstico citogenético

- Diagnóstico prenatal de enfermedades hereditarias

7. Diagnóstico en medicina legal y forense.

- VNTR

- STR

8. Modelos animales de enfermedad de base genética.

- Modelos murinos de enfermedades hereditarias simples (mendelianas): Desórdenes de la visión, de la audición, neurológicos y neuromusculares. Enfermedades de los huesos y cartílagos, de la piel y el pelo, hematológicas, inmunodeficiencias y metabólicas

- Modelos murinos de enfermedades hereditarias complejas (multigénicas): Cáncer, obesidad, diabetes, etc.

UNIDAD DIDÁCTICA 1. PREVENCIÓN DE RIESGOS ASOCIADOS A LA MANIPULACIÓN DE ANIMALES.

1. Identificación de riesgos asociados a manipulación de animales.
2. Aplicación de la ergonomía asociada al manejo de animales.
3. Utilización de sistemas de barrera para prevenir la huida de animales de la instalación.
4. Aplicación de técnicas de captura de animales huidos.
5. Utilización de instrumentos y mecanismos de captura de animales a distancia: características y funcionamiento.
6. Identificación de riesgos asociados a transmisión de enfermedades de animales, zoonosis: definición, clasificación, etiopatogenia y factores de riesgo.
7. Utilización de medidas preventivas y profilácticas de zoonosis.
8. Prevención de alergias en los trabajadores de una instalación de animales: definición. Factores de riesgo y predisponentes de las alergias.
9. Utilización de las medidas preventivas.
10. Aplicación de procedimientos normalizados de trabajo asociados a riesgos biológicos.

UNIDAD DIDÁCTICA 2. PREVENCIÓN DE RIESGOS ASOCIADOS AL USO DE PRODUCTOS, INST