- Tipos de muestras para análisis de ADN, ARN y proteínas.
- - Extracción de ADN (a partir de sangre, tejidos o células en cultivo, células bucales,…)
- - Extracción de ARN (mediante tiocianato de guanidina, urea-cloruro de lítio, purificación de poli(A)-ARN,
- Determinación analítica. Perfil analítico. Cartera de servicios.
- - Determinación de ácidos nucleicos
- - Separación analítica y preparativa del ADN (electroforesis analítica, geles de agarosa, …)
- Errores más comunes en la manipulación de las muestras.
- - Identificación y etiquetado de las muestras
- - Contaminación (por RNAsas, DNA,…)
- - Degradación enzimática
- Características generales de la obtención y procesamiento de muestras para análisis de ADN, ARN y proteínas.
- - Obtención de ADN y ARN a partir de tejidos líquidos (anticoagular)
- - Inhibidores RNAsas
- Prevención de riesgos en la obtención, manipulación y procesamiento de muestras biológicas.
- - Recepción o toma de muestras. Medidas preventivas
- - Precauciones generales relativas al laboratorio
- - Precauciones durante el desarrollo del trabajo
- - Reglas de higiene personal
- Etiquetado e identificación de las muestras.
- Sistemas y formatos de archivos. Sistemas de almacenamiento.
- Equipos de almacenamiento (-20ºC, - 80º C)
- Transporte de muestras (ADN: descongeladas, tubos estabilizadores ARN, tiempo de transporte recomendado 72 horas. ARN, congelado mediante agentes crioprotectores y con inhibidores de ARNAsas).
- Prevención de riesgos en la conservación y transporte de muestras biológicas.
- - Precauciones durante el desarrollo del trabajo
- - Reglas de higiene personal
- - Almacenamiento de muestras biológicas. Zonas de acceso restringido. Contenedores específicos. Manejo con EPIs
- - Transporte de material biológico. Sistema básico de embalaje. Identificación
- Composición molecular, estructura y función de los ácidos nucleicos.
- - Composición química y estructura de los ácidos nucleicos: Nucleótidos de importancia biológica y Factores que estabilizan la doble hélice
- - Funciones de los ácidos nucleicos
- Descripción de las enzimas asociadas a los ácidos nucleicos.
- - Endonucleasas (Tipo 1 y 2)
- - Polimerasas
- - Ligasas
- - Nucleasas
- - Fosfatasas
- - Quinasas
- - ARNasas
- Replicación del ADN.
- - Modo semiconservativo
- - Horqueta de replicación
- - Enzimas que intervienen en el proceso
- - Molécula accesoria: Iniciador
- Transcripción del ADN y su control.
- - Proceso: Cadena molde o antisentido. ARNm o transcripto primario. Enzima que dirige: polimerasa de ARN
- - Modificaciones postranscripcionales.
- Mecanismos de reparación del ADN.
- - Agentes genotóxicos y mecanismos de reparación del DNA
- - Reparación de dímeros de pirimidinas mediante fotoreactivación
- - Remoción de grupos metilo
- - Bases mal apareadas
- - Metilación del DNA
- - Reparación del DNA durante o después de su replicación
- - Reparación de cortes en ambas cadenas del DNA
- - Sistemas De reparación de DNA: NER (Nucleotide Excision Repair)
- - Mecanismos de reparación de DNA: BER (Base escisión Repair)
- Mutaciones del ADN, alteraciones en las proteínas que sintetizan y enfermedades asociadas.
- - Alteraciones que puede sufrir el ADN: Mismatch (mal apareamiento), Desaminación, Pérdida de bases, Unión covalente entre bases de la misma cadena, Unión de grupos alquilo, Ruptura de simple cadena (nick) y Ruptura de doble cadena
- - Alteraciones en las proteínas que se sintetizan y enfermedades asociadas. Desnaturalización
- Estructura y función de las proteínas.
- - Aminoácidos y neurotransmisores
- - Enlaces peptídicos, oligopeptidos y polipeptidos
- - Estructura primaria, secundaria , terciaría y cuaternaria
- - Funciones de las proteínas: estructural, reguladora, de transporte, de reserva, enzimática, mensajera y de receptores químicos
- Transcripción y traducción.
- - Moléculas implicadas en la transcripción y traducción de las proteínas
- - Fases de la transcripción de las proteínas
- - Fases de la traducción de las proteínas
- - Regulación de la transcripción y traducción
- Síntesis y modificación de las proteínas.
- - Moléculas implicadas en la síntesis y traducción de las proteínas
- - Fases de la síntesis de las proteínas
- - Fases de la modificación de las proteínas
- - Regulación de la síntesis y modificación de las proteínas
- Alteraciones conformacionales de las proteínas.
- - Serpinopatías
- - Proteínas priónicas
- - Neuroserpinas
- - Hemoglobina
- - Repeticiones de glutamato
- - Proteína Tau
- - Inmunoglobulinas cadenas ligeras
- - Proteína CFRT Péptido B-amiloide
- - Superóxido dismutasa
- - B2 microglobulina
- Electroforesis.
- - Tipos de electroforesis: unidimensionales, bidimensionales y técnicas relacionadas.
- - Separación electroforética de las proteínas séricas. Patrones de normalidad y de alteración
- - Características del material y de los reactivos. Averías o disfunciones
- Técnicas cromatográficas.
- - Características de los equipos. Condiciones de uso y mantenimiento
- - Calibración. Averías o disfunciones
- - Características del material y de los reactivos
- Técnicas de inmunodetección.
- - Inmunocitoquímica
- - Western blot
- - Inmunoprecipitación
- - Co-inmunoprecipitación
- - Pull-down
- - TUNEL
- Espectrometría de masas.
- - Fundamento y aplicaciones.
- - Características de los equipos.
- - Condiciones de uso y mantenimiento. Calibración. Averías o disfunciones.
- - Características del material y de los reactivos.
- Tecnología de microarrays y chips de proteínas.
- - Microarrays de ADN: Diseño de un microarrays de ADN. Tipos
- - Microarrays de Proteínas: Diseño de un microarrays de proteínas. Tipos
- - Microarrays de Carbohidratos: Diseño de microarrays de carbohidratos. Aplicaciones
- - Microarrays de Células
- - Microarrays de Tejidos
- - Perspectivas de mercado de los microarrays y biochips en el área de salud humana
- Bioinformática. Bases de datos de proteómica.
- - Genómica funcional
- - Relación entre la biología y la informática
- - Biochips
- - Bioinformática
- - Bibliografía UNIDAD FORMATIVA 2. ANÁLISIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS
- Extracción. Purificación y análisis espectroscópico y electroforético de ácidos nucleicos.
- - Material y métodos
- Amplificación de ADN mediante PCR y variantes.
- - El ADN
- - Los enzimas
- - Los nucleótidos
- - Los cebadores
- - Limitaciones y problemas de la PCR (tamaño secuencias limitado, PCR previa, contaminación, inespecifidad de cebadores,…)
- Electroforesis y técnicas relacionadas.
- - Factores que afectan a la movilidad del ADN en el gel (masa molecular, voltaje, composición de las bases, temperatura, solución amortiguadora,…)
- - Tipos de electroforesis: PFGE (Pulsed Field Gel Electroforesis), OFAGE (Orthogonal Field Alternative Gel), FIGF (Field Inversion Gel Electroforesis), CHEF (Contour Clamped Homogeneus Electric Field), Electroforesis preparative.
- - Aplicaciones: Análisis comparativos de patrones de restricción cromosómicos, construcción de mapas cromosómicos, topología y tamaño de cromosomas, análisis de elementos extracromosómicos
- Hibridación de ácidos nucleicos.
- - Factores que influyen en la hibridación.
- - Composición de las bases.
- - Concentración de ADN/ARN y tiempos Cot y Rot
- - Concentración y tamaño de la sonda
- - Concentración ADN diana
- - Desnaturalización del ADN diana y fijación a un soporte.
- - Marcaje de una sonda monocadena
- - Hibridación: mezcla y renaturalización
- - Detección de los híbridos
- - Medio de reacción
- - Polímeros inertes
- - Tiempos de hibridación y mecanismos de detección.
- - Tipos de hibridación (soporte sólido, en fase líquida, in situ, in situ sobre cromosomas, in situ de bacterias para clonaje).
- Análisis de fragmentos de ADN.
- - Método Southerm
- - Métodos de transferencia (por capilaridad, por vacío, electroforético)
- - Aplicaciones del Método Southerm
- - Mapas de restricción
- - Detección de polimorfismos (RFLP, VNTR, STR) y deleciones.
- Secuenciación.
- - Secuenciación química, método de Maxam y Gilbert
- - Secuenciación enzimática, método de Sanger o de los dideoxinucleótidos.
- - Tipos de secuenciaciones enzimáticas (Cíclica, múltiple, automática, quimioluminiscente)
- Tecnología de microarrays y chips de ácidos nucléicos.
- - Utilidad: analizar el genoma completo de un organismo
- - Fundamento: hibridación con sondas
- - Soporte: placas microtitulación o membranas de blotting
- - Fabricación: pueden ser creados en el laboratorio o usando robótica : Macroarray: señales > 300 micras y Microarray: pocillos < 200 micras
- Aplicaciones: identificación de secuencias (genes, Mutaciones), determinación del nivel de expresión génica, descubrimiento de genes, diagnóstico de enfermedades, Farmacogenómica: desarrollo de Fármacos y Toxicogenómica: investigación Toxicológica
- Bioinformática. Bases de datos de genómica.
- - Introducción a la Bioinformática
- - Consulta de Bases de datos en biología molecular
- - Alineamiento de secuencias
- - Predicción de genes
- - Introducción a los microarrays de DNA
- Genoma: células, cromosomas y genes.
- - Definición de genoma, gen y cromosoma
- - Organización, estabilización y localización del genoma
- Estructura y función de los genes y cromosomas.
- - Estructura del ADN
- - Estructura del ARN
- - El código genético
- - Secuencias codificantes versus no codificantes
- Bases cromosómicas de la enfermedad.
- - Citogenética. El cariotipo normal en los roedores de laboratorio
- - Anomalías del número de cromosomas (Heteroploidías)
- - Anomalías de la estructura de los cromosomas
- Herencia y enfermedad: enfermedades monogénicas, patrones de herencia, enfermedades poligénicas. Susceptibilidad genética.
- - Genético
- - Congénito
- - Hereditario
- Genética de las enfermedades comunes.
- - Modelos provenientes de mutaciones espontáneas o inducidas
- - Modelos generados por transgénesis
- - Modelos generados in Vitro por manipulación de células ES
- - Modelos generados por transgénesis condicional
- Genética de la reproducción y del diagnóstico prenatal.
- - Modelos animales del desarrollo embrionario
- - Diagnóstico prenatal rápido de aberraciones cromosómicas por PCR
- - Diagnóstico citogenético
- - Diagnóstico prenatal de enfermedades hereditarias
- Diagnóstico en medicina legal y forense.
- - VNTR
- - STR
- Modelos animales de enfermedad de base genética.
- - Modelos murinos de enfermedades hereditarias simples (mendelianas): Desórdenes de la visión, de la audición, neurológicos y neuromusculares. Enfermedades de los huesos y cartílagos, de la piel y el pelo, hematológicas, inmunodeficiencias y metabólicas
- - Modelos murinos de enfermedades hereditarias complejas (multigénicas): Cáncer, obesidad, diabetes, etc.
